تثبيط انقسام فيروس التهاب الكبد الوبائى سى معمليا

 "فيروس الكبد الوبائي سى  (HCV)  عبارة عن شريط منفرد من الحامض النووي الريبوزى بطول 9500 قاعدة نيتروجينية و تظهر العازلات في مختلف الفيروس اختلاف وراثي بين فيما بينهما مما أدى إلى ظهور على الأقل 6 أنماط رئيسية. و في جميع الأنماط المعروفة يؤدى الجينوم الفيروسي إلى تخليق بروتين متعدد بطول حوالي  3000 حمض أميني وهذا البروتين المتعدد  يتم انشطاره إلى مجموعة بروتينات منها الكور (C)  والغلاف(E1, E2)  والبر وتينات  الغير تركيبية (NS2 to NS5) ويسبق هذا الجزء جزء  آخر ليس به شفرة وراثية(NCR)  بطول حوالي 340 قاعدة نيتروجينية و الذي ليس به أي اختلافات تذكر بين الأنماط المختلفة وبعضها. و هذا الجزء يحتوى على  تركيب يسهل الدخول إلي الريبسوم وهذه  خطوة ضرورية لانقسام الفيروس.

تعتبر الإصابه بفيروس الكبد الوبائي سى (HCV) من أهم المشاكل الصحية علي مستوى العالم التي تؤثر تأثير مباشر عل الكبد وتؤدى إلى تليفه و اصابته بالسرطان. والى الآن لا يوجد علاج فعال لتثبيط انقسام هذا الفيروس وقد أظهرت دراسات عديدة  أن نسبه استجابة  المرضى المصابين بالفيروس سي    (HCV)      للعلاج بالأنترفيرون نسبه ضئيلة تتراوح بين 15% إلي 25 % مما أدى إلي الحاجة إلي ظهور علاج آخر وفعال.

      في السنوات الأخيرة ظهرت تقنية استخدام النيوكليوتيدات المحورة (antisense primer)   كأسلوب علاجي جديد لتثبيط انقسام الفيروسات و التعبير الجينى. و تتكون هذه المركبات من شرائط منفردة للحمض ا لنووي الديوكسى ريبوز  (S-ODN) كملة تماما للتعاقب النيوكليوتيدى الموجود علي الحمض النووي الريبوزي (RNA) وعند ارتباط هذه الشرائط بالجينوم الفيروسي أو الخلوي المراد إيقاف نشاطه يؤدى هذا الارتباط إلي توقف كامل لآلية الترجمة  إلى البروتين.   و قد استهدفت هذة  الرسالة تثنيط انقسام تثبيط انقسام فيروس التهاب الكبد الوبائي سى (HCV) معمليا عن طريق تخليق شرائط منفردة للحمض ا لنووي الديوكسى  ريبوز  (S-ODN)مكملة تماما للتعاقب النيوكليوتيدى الموجود علي الحمض النووي الريبوزي لجزء فيروس التهاب الكبد الوبائي سى الذى ليس به شفرة وراثية (NCR RNA) وعند ارتباط هذه الشرائط  بهذا الجزء الذى ليس به أى شفرة وراثية يؤدى هذا الارتباط الى عدم دخول الريبسوم.

      و في الدراسة الحالية تم زراعة خلايا سرطان الكبد (HepG2)  في المعمل ثم عدوها بفيروس سي باستخدام مصل من شخص مصاب بفيروس الكبد الوبائي سي ثم  العمل علي إيقاف نشاط الفيروس وانقسامه باستخدام تقنية النيوكليوتيدات المحورة (antisense) حيث تم معالجة خلايا خلايا سرطان الكبد (HepG2) بتركيزات من النيوكليوتيدات المحورة  (S-ODN 2, S-ODN1) 1 ميكرومولر، 2 ميكرومولر لمدة 24, 48, 72 ساعة وبعد ذلك تم معرفة نشاط الفيروس داخل الخلايا المنزرعة عن طريق استخلاص الحامض النووى الريبوزى المرسل (رنا المرسل) من الخلايا التى تعرضت لتركيزات مختلفة من النيوكليوتيدات المحورة والخلايا العادية  (control)و تحليل (رنا المرسل) باستخدام النسخ العكسى و التفاعل المتبلمر المتسلسل (RT-PCR). وايضا تحددت النسبة الكمية للفيروس داخل الخلايا المنزرعة عن طريق استخلاص الحامض النووى الريبوزى المرسل (رنا المرسل) و تحليله باستخدام .(Real time –PCR)

وقد اظهرت النتائج نشاط و انقسام فيروس التهاب الكبد الوبائي سى فى الخلايا المنزرعة حتى بعد اضافة 1أو 2 ميكرومولر منS-ODN2 or S-ODN1  لمدة 24 ساعة اما عند اضافةS-ODN2 or S-ODN1  باى من التركيزين لمدة 48 استطاع كل منهما على تثبيط  انقسام الفيروس فى الخلايا المنزرعة واستمر هذا التأثير عند 72 ساعه. وايضا أثبت التحليل الكمى قدرة النيوكليوتيدات المحورة  ((S-ODN2 or S-ODN1 على ثبيط انقسام فيروس التهاب الكبد الوبائي سى  (HCV) وبذلك تكون قد أسهمت هذة الرسالة فى تقديم نظام خلوي معملي لتقييم أسلوب تثبيط نشاط فيروس الكبد الوبائي سى (HCV) بطريقة سريعة و فعالة تمهيدا للاستخدام في حيوانات التجارب ثم الأنسان."