دراسات على سبيروبلازما سيتري المسبب لمرض العنيد في الموالح و مرض مكنسة العجوز التي تصيب البرسيم الحجازي في مصر

                                "تعتبر الموالح من أهم أشجار الفاكهة في مصر. يعتبر المرض العنيد أو ما يعرف باسم مرض ضعف النمو و  صغر حجم ثمار الموالح و  الذي تسببه اسبيروبلازما سيترىوالتى تعتبر من اخطر و  أهم الأمراض التي تصيب الموالح .

 كذلك يعتبر البرسيم الحجازى من أهم محاصيل الأعلاف الأقتصادية  فى مصر و مرض مكنسة العجوزالذى تسببه الفيتوبلازما من اخطر و أهم الأمراض التي تصيب البرسيم الحجازى فى مصر.

صممت هذه الدراسة بهدف عزل وتعريف اسبيروبلازما سيترى باستخدام بعض الطرق الحساسة من أشجار مختلفة من الموالح المصابة بالإضافة إلى عزل وتعريف مرض مكنسة العجوز الذي تسببه الفيتو بلازما

و يمكن تلخيص النتائج التي تم الوصول إليها في النقاط التالية:-

1- الحصول على عينات من أشجار الموالح المصابة بمرض العنيد من  محافظات الجيزة والقليوبية والشرقية بها أعراض لإعراض مشابهة لاعراض مرض العنيد في الموالح. كما أنه تم الحصول على عينات البرسيم الحجازى من مركز البحوث الزراعية با لجيزة بها أعراض مشابهة لاعراض مرض مكنسة العجوز . 

2- أثبات القدرة المرضية للمسبب المرضى المعزول من الموالح  عن طريق الحامول و  التطعيم بأفرع من الأشجار التي تم أثبات وجود المرض بها على شتلات نارنج حيث ظهرت الأعراض بعد حوالي شهرين من التطعيم . تظهر أعراض ذبول للأفرع و  لون اصفر باهت للأوراق مع نمو بطيء ومتقزم عن معاملات المقارنة و تميزت الأوراق  و تميزت الأفرع النامية حديثا بأن العقد متقاربة و السلاميات متقزمة بدرجة كبيرة كما تم أثبات القدرة المرضية للمسبب المرضى المعزول من البرسيم الحجازى لأول مرة فى مصر  عن طريق الحامول حيث ظهرت الأعراض على البرسيم والطماطم والونكا بعد حوالي 2 أو3 أسابيع . 

3- عزل و تنمية المسبب المرضى لمرض العنيد فى الموالح  على بيئة صناعية سائلة هي C3G من أوراق و ثمار أشجار مصابة و كما يستدل على نمو الكائن الذي تم عزله عن طريق تغير لون البيئة من الأحمر إلى  الاصفر. 

4- تم تنمية المسبب المرض على بيئة C3G صلبة وأمكن الحصول على مستعمرات الاسبيروبلازما سيترى التي بشبة تماما البيض المقلي على الأطباق التي  

 تحتوى على بيئة صلبة  . و لم يتم الحصول على نمو على البيئات السائلة أو الصلبة التي تم تلقيحها بمستخلصات من العينات التي استخلصت من الأنسجة السليمة.

5- وقد تمت  دراسة بعض العوامل المؤثرة على نمو عزلة الاسبيروبلازما سيترى تحت الدراسة أوضحت النتائج ما يلى :

درجة الحرارة المثلى 32مº، فشل عزلة الاسبيروبلازما سيترى فى النمو عند التعرض لدرجات حرارة أعلى من45 مº  لمدة 15 دقيقة فى حمام مائى، نقص pH البيئة من 63 ,7  الى  62, 4   فى اليوم الخامس من التلقيح و  أخيرًا عند اختبار  المضاد الحيوى التترا سيكلين با لرش على النباتا ت وجد انه يؤثر على معدل نمو الأسبيروبلازماوتختفى الأعراض. 

6- كذلك تم التاكد من نمو المسبب المرضى الاسبيروبلازما سيترى في البيئة السائلة بفحص الشكل الظاهري للكائن بواسطة استخدام  ميكروسكوب تباين الأطوار و  التعرف على وجود الوحدات الحلزونية المتحركة عديمة الجدار من خلال فحص قطرات من المزرعة السائلة للمسبب المرضى. 

7- استخدم صبغة داين بنجاح في الكشف عن النباتات المصابة بمرض العنيد و المصابة بمر ض مكنسة العجوز وذلك من خلال عمل قطاعات في الأنسجة للعرق الوسطي و  أعناق الأوراق المصابة حيث تلونت أنسجة اللحاء باللون الأزرق الداكن في الأنسجة المصابة و عدم تلونها في السليمة. 

8- استخدم صبغة دابى (DAPI) بنجاح في الكشف عن النباتات المصابة بمر ض مكنسة العجوز وذلك من خلال عمل قطاعات في الأنسجة للعرق الوسطي و أعناق الأوراق المصابة حيث يوجد بالفحص أجسام لا صقة فى منطقة اللحاء في الأنسجة المصابة و  عدم وجودها في السليمة. 

9-  استخدم اختبار الاليزا لتشخيص و الكشف عن الاسبيروبلازما سيترى في الأنواع المختلفة للموالح و  كذلك في البيئة النامي فيها المسبب المرضى و ثبت أن العزلة المستخدمة في الدراسة هي عزلة من الاسبيروبلازما سيترى. 

10- استخدام أستخلاص الحامض النووي DNA من العينات المصابة والبيئة السائلة لعزلة الاسبيروبلازما سيترى وكذلك أستخلاص الحامض النووي DNA من ا لبرسيم الحجازى والطماطم التى تم نقل المسبب المرضى إليها بواسطة الحامول .

11- استخدمت الاختبارات المعتمدة على تفاعل إنزيم البلمرة المتسلسلPCR  في الكشف عن الحمض  النووي للاسبيروبلازما سيترى في أنسجة الأشجار المصابة و كذلك في المسبب النامي على البيئة السائلة وكذلك استخدمت  فى الكشف عن الحمض النووى للفيتوبلازما المسببة لمرض مكنسة العجوز فى الأنسجة المصابة فى البرسيم الحجازى و الطماطم 

12 --تصميم بادئ  D´, D الخاص الاسبيروبلازما سيترى  لعز ل جينSpiralin  و ذلك من الأشجار المصابة وكذلك من البيئة النامي عليها الاسبيروبلازما سيترى   وتم الحصول على  ناتج PCR من خلال التفريد الكهربي و ذلك باستخدام الاجار و الصبغ بالايثيديم بروميد وكان الناتج  1053 زوج من القواعد.  

13- تصميم بادئ  R16F2 , R16R2 الخاص بالفيتوبلازما عامة  وتم الحصول على   ناتج PCR من خلال التفريد الكهربي و ذلك باستخدام الاجار و الصبغ بالايثيديم بروميد وكان الناتج  1200زوج من القواعد. 

14- تصميم  المجس النووي لجين  spiralin  معلم بمادة  ال  Digoxigenin وذلك باستخدام PCR لناتج  1053 زوج من القواعد من الأشجار المصابة ومن البيئة النامي عليها الاسبيروبلازما سيترى. 

15- استخدمت طريقة تهجين الحامض النووي باستخدام المجس المعلم الخاص بجين    spiralin للكشف عن وجود الاسبيروبلازما سيترى داخل الأشجار المصابة وايضا استخدمت طريقة تهجين الحامض النووي للكشف عن وجود الفيتوبلازما."